日前,由中國水產科學研究院黑龍江水產研究所耿龍武助理研究員等人完成的“一種淡水魚類精子掃描電鏡樣品制備方法”獲得國家發明專利授權,專利號為:ZL 201210046338.1。
該專利解決了傳統方法脫水、干燥、粘樣等過程中,容易因表面張力變化和外力機械損傷而引起精子開裂或龜裂 、斷裂等,使得表面結構被破壞,導致觀察效果差和難于進行微細形態學分析的問題。
與傳統方法相比,本方法在樣品脫水與干燥、密度控制、樣品臺載體、點樣方式等環節進行改進,制備過程由固定液配制、樣品固定、樣品臺準備、樣品滴片、樣品鍍膜完成。本發明優點在于:本發明的優點在于:1)精子固定后的樣品不經過乙醇脫水、干燥,可避免因表面張力變化而引起精子斷裂、開裂或龜裂等表面結構破壞;2)精液固定后經PBS磷酸鹽緩沖液沖洗2~3次,可去除精漿等其它成分,使樣品電鏡觀察時更清晰;3)精子滴片前用PBS磷酸鹽緩沖液稀釋成濃度數量級為106~107個/ml,使精子分散均勻、密度適中,利于獲得單個精子完整形態觀察結果;4)先粘貼蓋玻片、后滴片,可避免樣品受到外力機械損傷;5)滴片時采用微量加樣槍,并用針頭分散滴液,可避免樣品層太厚影響觀察效果;6)鍍膜儀噴金時間控制在90~110s,使精子樣品表面金膜厚度為9~11nm,可避免電鏡觀察時精子頭部與鞭毛光線反差過大。
本發明的技術特點是方法簡便、易操作,精子完整率高、分布密度適中,技術成本低,可應用于淡水魚類精子掃描電鏡樣品的制備。