由我院黃海所環(huán)境室張旭志博士主持的“利用電化學(xué)檢測(cè)與等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)相結(jié)合進(jìn)行目標(biāo)基因快速分析”研究取得重要進(jìn)展,該研究由國(guó)家自然科學(xué)青年基金項(xiàng)目“環(huán)介導(dǎo)等溫基因擴(kuò)增(LAMP)過程的電化學(xué)信息研究”和黃海所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目“恒溫?cái)U(kuò)增自動(dòng)基因檢測(cè)技術(shù)開發(fā)與應(yīng)用”共同資助完成。
該研究結(jié)合LAMP和電化學(xué)伏安檢測(cè)技術(shù),建立了一種目標(biāo)基因甄別新方法。成功的LAMP反應(yīng)把游離態(tài)的三磷酸2-脫氧鳥苷(dGTP,反應(yīng)物之一)組裝到鏈狀產(chǎn)物DNA中去,結(jié)果引起該物質(zhì)在碳納米管陣列電極上氧化電流的顯著下降。因此,這種伏安響應(yīng)變化可以用來表征LAMP結(jié)果,進(jìn)而指示出模板DNA中目標(biāo)基因的信息。大腸埃希氏菌普通菌株中的malB基因作為實(shí)例得到驗(yàn)證:30分鐘LAMP生化反應(yīng)和約2分鐘的微分脈沖伏安檢測(cè)操作后,8.0阿克模板DNA中該基因的定性信息得到準(zhǔn)確甄別,與傳統(tǒng)的凝膠電泳法及熒光染料法所得結(jié)果完美一致。
該新方法具有操作簡(jiǎn)單、響應(yīng)快、無需擴(kuò)后分離處理和輔助試劑、費(fèi)用低等明顯優(yōu)點(diǎn),易于在環(huán)境監(jiān)測(cè)、臨床、檢驗(yàn)檢疫、轉(zhuǎn)基因甄別等諸多領(lǐng)域推廣應(yīng)用。此外,該方法無需電極表面的DNA探針修飾步驟,檢測(cè)儀器易實(shí)現(xiàn)小型化,便于攜帶,更適用于現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。